วิธีการวัดระดับบิลิรูบินในเครื่องวิเคราะห์ทางชีวเคมีมีอะไรบ้าง?

บิลิรูบินเป็นเม็ดสีเหลืองที่เกิดขึ้นระหว่างการสลายเซลล์เม็ดเลือดแดงตามปกติ การวัดระดับบิลิรูบินเป็นสิ่งสำคัญในการวินิจฉัยความผิดปกติต่างๆ ที่เกี่ยวข้องกับตับและเลือด ในฐานะซัพพลายเออร์เครื่องวิเคราะห์ชีวเคมีชั้นนำ เราเข้าใจถึงความสำคัญของการตรวจวัดบิลิรูบินที่แม่นยำ ในบล็อกนี้ เราจะสำรวจวิธีการต่างๆ ในการวัดระดับบิลิรูบินในเครื่องวิเคราะห์ทางชีวเคมี

1. วิธีการไดอะโซไทเซชัน

วิธีไดอะโซไทเซชันเป็นหนึ่งในเทคนิคที่ใช้กันมากที่สุดในการวัดบิลิรูบิน ขึ้นอยู่กับปฏิกิริยาระหว่างบิลิรูบินกับเกลือไดโซเนียม เมื่อมีรีเอเจนต์ไดอาโซเนียม บิลิรูบินจะเกิดปฏิกิริยาทางเคมีเพื่อสร้างอะโซบิลิรูบิน ซึ่งมีสีเฉพาะตัวที่สามารถตรวจวัดด้วยสเปกโตรโฟโตเมตริกได้

วิธีไดอะโซไทเซชันมีสองประเภทย่อย: วิธีทางตรงและทางอ้อม วิธีการโดยตรงจะวัดบิลิรูบินคอนจูเกต บิลิรูบินแบบคอนจูเกตละลายน้ำได้และสามารถทำปฏิกิริยาโดยตรงกับรีเอเจนต์ไดอาโซเนียมในตัวกลางที่เป็นน้ำ เมื่อเกลือไดอาโซเนียมทำปฏิกิริยากับบิลิรูบินคอนจูเกต จะเกิดอะโซบิลิรูบินสีแดง - สีม่วง การดูดกลืนแสงของผลิตภัณฑ์สีนี้วัดที่ความยาวคลื่นจำเพาะ โดยปกติจะอยู่ที่ประมาณ 540 - 560 นาโนเมตร

ในทางกลับกัน จะใช้วิธีทางอ้อมเพื่อวัดบิลิรูบินทั้งหมด เนื่องจากบิลิรูบินที่ไม่ถูกควบคู่จะไม่ละลายในน้ำ จึงมีการเติมสารเร่งปฏิกิริยา เช่น คาเฟอีนหรือเมทานอล ลงในตัวอย่าง เครื่องเร่งจะช่วยละลายบิลิรูบินที่ไม่ถูกคอนจูเกต ปล่อยให้ทำปฏิกิริยากับรีเอเจนต์ไดโซเนียม หลังจากปฏิกิริยา บิลิรูบินทั้งหมด (คอนจูเกต + คอนจูเกตที่ไม่คอนจูเกต) จะถูกวัดเป็นอะโซบิลิรูบิน ด้วยการลบค่าของบิลิรูบินคอนจูเกต (วัดโดยวิธีโดยตรง) ออกจากบิลิรูบินทั้งหมด จึงสามารถกำหนดปริมาณของบิลิรูบินที่ไม่ถูกคอนจูเกตได้

ของเราส่วนใหญ่เครื่องวิเคราะห์กึ่งอัตโนมัติทางชีวเคมีโมเดลต่างๆ ได้รับการออกแบบมาเพื่อดำเนินการวิธีไดอะโซไทเซชันด้วยความแม่นยำสูง ลักษณะกึ่งอัตโนมัติของเครื่องวิเคราะห์เหล่านี้ช่วยให้สามารถเติมตัวอย่างด้วยตนเองได้ ซึ่งเหมาะสำหรับห้องปฏิบัติการขนาดเล็กหรือห้องปฏิบัติการที่มีปริมาณตัวอย่างต่ำ

2. วิธีเอนไซม์

วิธีการวัดค่าบิลิรูบินด้วยเอนไซม์กำลังได้รับความนิยมมากขึ้นเรื่อยๆ เนื่องจากมีความจำเพาะและความแม่นยำสูง วิธีนี้ใช้เอนไซม์เพื่อกระตุ้นการเกิดออกซิเดชันของบิลิรูบิน เอนไซม์ที่ใช้กันมากที่สุดชนิดหนึ่งคือบิลิรูบินออกซิเดส

บิลิรูบินออกซิเดสเร่งปฏิกิริยาออกซิเดชันของบิลิรูบินเป็นบิลิเวอร์ดิน สามารถตรวจสอบปฏิกิริยาด้วยสเปกโตรโฟโตเมตริกได้โดยการวัดค่าการดูดกลืนแสงที่ลดลงที่ความยาวคลื่นเฉพาะของบิลิรูบิน (โดยปกติจะอยู่ที่ประมาณ 450 นาโนเมตร) อัตราการดูดซึมที่ลดลงจะเป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นของบิลิรูบินในตัวอย่าง

วิธีเอนไซม์มีข้อดีหลายประการ มีความเฉพาะเจาะจงมากกว่าวิธีไดอะโซไทเซชันเนื่องจากทำปฏิกิริยากับบิลิรูบินเท่านั้น และไม่ทำปฏิกิริยากับสารอื่นๆ ที่อาจรบกวนปฏิกิริยาไดอะโซไทเซชัน นอกจากนี้ วิธีการใช้เอนไซม์ยังได้รับผลกระทบน้อยกว่าจากความขุ่นของตัวอย่างและภาวะเม็ดเลือดแดงแตก ซึ่งอาจเป็นสาเหตุสำคัญของข้อผิดพลาดในวิธีไดอะโซไทเซชัน

ของเราเครื่องวิเคราะห์ทางชีวเคมีกึ่งอัตโนมัติยังสามารถกำหนดค่าให้ใช้วิธีเอนไซม์ได้ ความยืดหยุ่นนี้ช่วยให้ห้องปฏิบัติการสามารถเลือกวิธีการที่เหมาะสมที่สุดตามความต้องการเฉพาะและลักษณะของตัวอย่างที่พวกเขาจัดการ

3. วิธีสเปกโตรโฟโตเมตริก

สเปกโตรโฟโตเมทรีเป็นเทคนิคพื้นฐานในการวิเคราะห์ทางชีวเคมี และยังสามารถใช้เพื่อวัดระดับบิลิรูบินได้โดยตรงอีกด้วย บิลิรูบินมีสเปกตรัมการดูดซึมที่มีลักษณะเฉพาะในบริเวณที่มองเห็นได้ ด้วยการวัดค่าการดูดกลืนแสงของตัวอย่างที่ความยาวคลื่นจำเพาะ จึงสามารถระบุความเข้มข้นของบิลิรูบินได้

วิธีสเปกโตรโฟโตเมตริกค่อนข้างง่ายและรวดเร็ว แต่ก็มีข้อจำกัดบางประการ อาจไม่สามารถแยกแยะระหว่างบิลิรูบินแบบคอนจูเกตและบิลิรูบินที่ไม่คอนจูเกตได้หากไม่มีตัวอย่างเพิ่มเติมก่อนการบำบัด นอกจากนี้ การมีอยู่ของสารอื่นๆ ในตัวอย่างที่ดูดซับที่ความยาวคลื่นเดียวกันกับบิลิรูบินอาจรบกวนการตรวจวัดได้

เพื่อเอาชนะข้อจำกัดเหล่านี้ เครื่องวิเคราะห์ชีวเคมีสมัยใหม่บางรุ่นใช้สเปกโตรโฟโตมิเตอร์แบบหลายความยาวคลื่น ด้วยการวัดการดูดกลืนแสงที่ความยาวคลื่นหลายช่วง เครื่องวิเคราะห์จึงสามารถแก้ไขการรบกวนจากสารอื่นๆ และให้การวัดบิลิรูบินที่แม่นยำยิ่งขึ้น

4. โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC)

แม้ว่าจะไม่ได้ใช้กันทั่วไปเหมือนกับวิธีการที่กล่าวข้างต้นในเครื่องวิเคราะห์ชีวเคมีตามปกติ แต่โครมาโตกราฟีของเหลวประสิทธิภาพสูง (HPLC) ก็เป็นวิธีการวัดบิลิรูบินที่มีความแม่นยำสูงและแม่นยำสูง

ใน HPLC ตัวอย่างจะถูกฉีดเข้าไปในคอลัมน์ที่เต็มไปด้วยเฟสที่อยู่นิ่ง ส่วนประกอบของบิลิรูบินในตัวอย่างจะถูกแยกออกตามความชอบที่แตกต่างกันสำหรับเฟสที่อยู่นิ่งและเฟสเคลื่อนที่ จากนั้นเศษส่วนบิลิรูบินที่แยกออกมาจะถูกตรวจพบโดยเครื่องตรวจจับ ซึ่งโดยปกติจะเป็นเครื่องตรวจจับ UV - Vis

HPLC สามารถแยกและหาปริมาณบิลิรูบินในรูปแบบที่แตกต่างกัน ซึ่งรวมถึงบิลิรูบินแบบคอนจูเกตและบิลิรูบินที่ไม่ถูกคอนจูเกต ตลอดจนไอโซเมอร์ของพวกมัน ทำให้เป็นเครื่องมืออันมีค่าสำหรับการวิจัยและการวินิจฉัยความผิดปกติที่เกี่ยวข้องกับบิลิรูบินที่ซับซ้อน อย่างไรก็ตาม HPLC เป็นวิธีที่มีราคาแพงและใช้เวลามากกว่าเมื่อเทียบกับวิธีอื่นๆ และต้องใช้ทักษะและอุปกรณ์เฉพาะทางมากกว่า

ปัจจัยที่ส่งผลต่อการวัดบิลิรูบิน

ปัจจัยหลายประการอาจส่งผลต่อความแม่นยำของการตรวจวัดบิลิรูบินในเครื่องวิเคราะห์ชีวเคมี ปัจจัยที่สำคัญที่สุดประการหนึ่งคือการจัดการตัวอย่าง บิลิรูบินไวต่อแสง และการสัมผัสกับแสงอาจทำให้แสงสลายได้ ดังนั้นตัวอย่างควรได้รับการปกป้องจากแสงในระหว่างการรวบรวม การจัดเก็บ และการวิเคราะห์

ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกหรือการสลายของเซลล์เม็ดเลือดแดงสามารถรบกวนการวัดบิลิรูบินได้เช่นกัน เฮโมโกลบินที่ปล่อยออกมาจากเซลล์เม็ดเลือดแดงที่ถูกสลายสามารถดูดซับที่ความยาวคลื่นใกล้เคียงกับบิลิรูบิน ส่งผลให้ผลลัพธ์ที่ไม่ถูกต้อง ความขุ่นในตัวอย่างที่เกิดจากไขมันในเลือดหรืออนุภาคอื่นๆ ยังสามารถกระจายแสงและส่งผลต่อการวัดค่าการดูดกลืนแสง

ความสำคัญของการวัดบิลิรูบินที่แม่นยำ

การวัดบิลิรูบินที่แม่นยำเป็นสิ่งจำเป็นสำหรับการวินิจฉัยและการรักษาโรคต่างๆ ระดับบิลิรูบินรวมที่เพิ่มขึ้นสามารถบ่งบอกถึงโรคตับ เช่น โรคตับอักเสบ โรคตับแข็ง หรือนิ่วในถุงน้ำดี บิลิรูบินที่ไม่เชื่อมต่อในระดับสูงอาจเกี่ยวข้องกับโรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกหรือความผิดปกติทางพันธุกรรมบางอย่าง ในทารกแรกเกิด ระดับบิลิรูบินที่สูงอาจทำให้เกิดอาการตัวเหลืองได้ และการวัดที่แม่นยำเป็นสิ่งสำคัญในการพิจารณาการรักษาที่เหมาะสม

ในฐานะซัพพลายเออร์เครื่องวิเคราะห์ชีวเคมี เรามุ่งมั่นที่จะจัดหาเครื่องวิเคราะห์คุณภาพสูงที่สามารถวัดระดับบิลิรูบินได้อย่างแม่นยำ เครื่องวิเคราะห์ของเราได้รับการออกแบบมาเพื่อลดผลกระทบของปัจจัยรบกวนและให้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้

บทสรุป

โดยสรุป มีหลายวิธีในการวัดระดับบิลิรูบินในเครื่องวิเคราะห์ชีวเคมี ซึ่งแต่ละวิธีก็มีข้อดีและข้อจำกัดของตัวเอง วิธีการไดอะโซไทเซชันมีการใช้กันอย่างแพร่หลายเนื่องจากความเรียบง่ายและคุ้มต้นทุน วิธีการใช้เอนไซม์มีความจำเพาะสูงและได้รับผลกระทบจากการรบกวนน้อยกว่า สเปกโตรโฟโตเมทรีเป็นวิธีการที่รวดเร็วและตรงไปตรงมา ในขณะที่ HPLC ให้การแยกและการหาปริมาณที่มีความละเอียดสูง

หากคุณกำลังมองหาเครื่องวิเคราะห์ทางชีวเคมีที่เชื่อถือได้สำหรับการตรวจวัดบิลิรูบิน เราขอเชิญคุณติดต่อเราเพื่อขอคำปรึกษาโดยละเอียด ทีมผู้เชี่ยวชาญของเราสามารถช่วยคุณเลือกเครื่องวิเคราะห์ที่เหมาะสมที่สุดตามความต้องการของห้องปฏิบัติการ ปริมาณตัวอย่าง และงบประมาณของคุณ เราทุ่มเทเพื่อนำเสนอผลิตภัณฑ์และบริการที่เป็นเลิศเพื่อรองรับความต้องการในการวินิจฉัยของคุณ

อ้างอิง

1. เบอร์ติส แคลิฟอร์เนีย แอชวูด ER และบรันส์ เดลาแวร์ (2012) หนังสือเรียน Tietz สาขาเคมีคลินิกและการวินิจฉัยระดับโมเลกุล เอลส์เวียร์
2. แคปแลน แอลเอ และเพสซ์ เอเจ (2010) เคมีคลินิก: ทฤษฎี การวิเคราะห์ สหสัมพันธ์ มอสบี้.
3. Rifai, N., Horvath, AR, & Wittwer, CT (2006) ชีววิทยาโมเลกุลวินิจฉัย: หลักการและการประยุกต์ เอลส์เวียร์